乙醇被*為是一種可以替代汽油的液體燃料,也是很好的燃油品質(zhì)改善劑,甘蔗可以生成乙醇燃料。為提高甘蔗發(fā)酵效率,可提取釀酒酵母a288c基因組,克隆INO1基因,在工業(yè)釀酒酵母中過(guò)表達(dá),提高菌種耐乙醇能力,提高細(xì)胞活力。下面簡(jiǎn)單介紹下提取和擴(kuò)增過(guò)程。
釀酒酵母基因組提取
原始釀酒酵母菌株s288c活化后,使用YPD固體培養(yǎng)基進(jìn)行平皿劃線分離得到釀酒酵母菌株s288c單菌落,牙簽挑取單菌落接50ml YPD液體培養(yǎng)基進(jìn)行30 ℃搖瓶培養(yǎng)24-30 h,用蜀科高速冷凍離心機(jī)去上清(采用高速冷凍離心機(jī)保護(hù)樣本生物活性);按照釀酒酵母基因組DNA提取試劑盒提取基因組DNA。
INO1基因序列擴(kuò)增
以釀酒酵母S288C基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。反應(yīng)條件如下:預(yù)變性94℃ 5 min,變性94℃30s,退火54℃ 30s,延伸72℃ 97s,30個(gè)循環(huán),延長(zhǎng)72℃。10min保存4℃。反應(yīng)結(jié)束后取2 uL PCR擴(kuò)增產(chǎn)物于1%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè)。采用膠回收試劑盒進(jìn)行膠回收。
回收后的PC產(chǎn)物進(jìn)行連接、轉(zhuǎn)化和菌液PCR檢測(cè),后進(jìn)行質(zhì)粒提取和測(cè)序。
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